蚯蚓溶解酶的冻干技术

    蚯蚓纤溶酶具有直接水解纤维蛋白和激活血纤维蛋白溶酶原成血纤维蛋白溶酶，有抗栓和溶栓作用。生物冻干机设备是利用生物真空冷冻干燥技术，进行各种生物制品冻干、人参提取冻干、蛋白酶冻干、益生菌冻干、龟膏冻干、多肽冻干、花青素冻干、蚯蚓纤溶酶冻干等加工生产。其中蚯蚓纤溶酶冻干粉制作工艺是经过一系列的前处理后采用真空冷冻干燥工艺，得到原有营养成分和活性物质的蚯蚓纤溶酶冻干粉。

蚯蚓纤溶酶冻干粉制造工艺具体如下：

1）制作蚯蚓粗粉：将活蚯蚓饥饿自然吐净泥沙，清洗，风干后低温粉碎，再进行过筛制成蚯蚓粗粉；

  2）制作粗酶溶液：将蚯蚓粗粉用磷酸缓冲液PBS和氯化钠溶液均匀后置于2~8℃冷柜静置12小时，在经过离心，得到上清液。再将上清液进行水浴处理后进行第二次离心取上清液，在上清液中加硫酸铵达静置后进行第三次离心，得到蚯蚓纤溶酶粗酶溶液；

3）粗酶纯化和修饰：将蚯蚓纤溶酶粗酶溶液过Sephadex G75凝胶层析，经过冲液洗脱得到蚯蚓纤溶酶纯酶。再加入活化的PEG修饰剂和硼酸缓冲液，进行保温反应，在经过磷酸缓冲液透析和离心进行上清液纯化，收集活性成分得到蚯蚓纤溶酶修饰酶；

4）蚯蚓纤溶酶冷冻干燥：将蚯蚓纤溶酶修饰酶装盘，料厚8mm左右，进行-45℃低温冷冻300min，而后在35pa真空下，进行一次干燥控温范围-30~10℃，升华干燥时间720min,除去大部分流离水，然后进行解析干燥控温范围10~40℃，干燥运行时间860min。经中生物冻干机的终点判断确定，冻干结束得到含水1%以内的蚯蚓纤溶酶冻干粉。